PEI（聚乙烯亚胺）转染试剂是一种常用的基因转染工具，主要用于将DNA或RNA引入细胞。其转染原理主要依赖于PEI的阳离子性质和细胞膜的负电荷特性。PEI是一种带有高电荷阳离子的多聚物，能够与带负电荷的DNA或RNA分子结合，形成稳定的复合物。这些复合物通过静电吸引附着在细胞膜上，并通过胞吞作用进入细胞。进入细胞后，PEI-DNA复合物在低pH环境中释放DNA，使其进入细胞质并最终进入细胞核，从而实现基因表达。PEI转染试剂可以应用于基因转染和基因治疗等应用。
慢病毒是一种可将长达6 kb的基因永久整合到人类细胞系中的可靠方法。第三代慢病毒生产使用四种质粒：一种含有转基因盒的转移载体质粒（例如，pLenti-MP2）和三种含有不同慢病毒包装和包膜基因的质粒（例如，pMD2.G、pDMLg/pRRE和pRSV-Rev）。这些质粒共转染到HEK293T细胞中，细胞可将感染性慢病毒释放到培养基中。PEI转染是将质粒共转染到HEK293细胞中最广泛使用的方法之一。
本文是一篇使用PEI转染试剂在10cm HEK293T细胞培养皿中制备慢病毒的说明书，具体步骤如下：
一、所需材料
2.含目标基因的转染级质粒DNA（pDNA）
3.HEK293T培养基
4.2.5×106悬浮HEK293T细胞，处于生长期
二、操作方法
1.转染前一天，在10 mL新鲜培养基中接种约2.5 x 106个HEK293T细胞。
2.转染当天，检查细胞融合度是否在60%-70%之间，用10 mL新鲜培养基替换旧培养基，并将培养皿放回培养箱。
3.在1 mL离心管中，加入10 µg pDNA和500 µL新鲜培养基，制备pDNA混合物，其中包含等摩尔量的三种慢病毒包装和包膜基因质粒，以及两摩尔当量的慢病毒转基因质粒。
4.取一新1ml离心管，加入25 µg PEI转染试剂和500 µL新鲜培养基，制备PEI混合物。
5.将pDNA混合物和PEI混合物轻轻混合，制成转染混合物。将转染混合物静置5-10分钟。注意：静置时间不要超过15分钟。
6.轻轻地将转染混合物逐滴加入细胞培养物中，混匀。将培养皿放回培养箱。
7.转染后约24小时，用10 mL新鲜培养基替换转染培养基，并加入所需的增强剂补充剂（例如丁酸钠、曲古霉素A等）。将旧培养基存放于50 mL离心管中，4°C 保存。将培养皿放回培养箱。
8.转染后约48小时，用10 mL新鲜培养基替换转染培养基，并加入所需的增强剂补充剂（例如丁酸钠、曲古霉素A等）。将旧培养基收集在24小时时用于收集上清液的同一50 mL离心管中，4°C保存。将培养皿放回培养箱。
9.转染后约72小时，将上清液收集到与之前步骤相同的50 mL离心管中，并储存在4℃下。细胞可以丢弃。
10.可以根据需要对上清液中的病毒进行检测、纯化和浓缩。慢病毒可以储存在-80℃下。
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