PEI（聚乙烯亚胺）转染试剂是一种常用的基因转染工具，主要用于将DNA或RNA引入细胞。其转染原理主要依赖于PEI的阳离子性质和细胞膜的负电荷特性。PEI是一种带有高电荷阳离子的多聚物，能够与带负电荷的DNA或RNA分子结合，形成稳定的复合物。这些复合物通过静电吸引附着在细胞膜上，并通过胞吞作用进入细胞。进入细胞后，PEI-DNA复合物在低pH环境中释放DNA，使其进入细胞质并最终进入细胞核，从而实现基因表达。
重组腺相关病毒(rAAV)是一种相对安全可靠的基因转移工具，可实现基因的稳定表达。rAAV的生产通常从三个质粒开始：一个质粒带有包含目标基因的转基因盒，两个质粒带有AAV包装基因。将这些质粒共转染到HEK293细胞中，将产生含有转基因副本的感染性rAAV。转染几天后，可以从细胞中收获rAAV。
PEI转染是将rAAV质粒共转染到HEK293细胞中最广泛使用的方法之一。与钙介导的转染相比，PEI的可靠性明显更高。而且与脂质介导的转染相比，PEI更具可扩展性和成本效益。
本文是一篇使用PEI转染试剂在HEK293细胞悬浮液中进行rAAV制备的说明书，具体方法如下：
一、所需材料
1.PEI转染试剂（1mg/mL）
2.含目标基因的转染级质粒DNA(pDNA)
3.HEK293培养基
4.5×106悬浮HEK293细胞，处于生长期
二、操作方法
1.转染当天，稀释并分装细胞培养物，取45 mL细胞培养物，其活细胞密度为1.1×106 cells/mL。
2.将等摩尔量的要共转染的质粒与新鲜培养基混合，在离心管中制备2.5 mL pDNA混合物，总pDNA浓度为20 µg/mL。
3.用新鲜培养基稀释125µL PEI转染试剂(1.0 mg / mL)，在离心管中制备2.5 mL PEI混合物，PEI终浓度为50 µg/mL。
4.将pDNA和PEI混合物混合并短暂涡旋以制备转染混合物，静置5-10分钟。混合后15分钟内请勿使用转染混合物。
5.涡旋时向45 mL细胞培养物中缓慢添加5 mL转染混合物，然后孵育。
6.转染后48-96小时可以收获和纯化rAAV。
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