PEI转染试剂是一种常用于基因转染的高分子载体。它通过与带负电荷的核酸分子结合，形成复合物，从而将这些复合物引入细胞中。PEI转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA转染，包括HEK-293、HEK-293T和CHO细胞等，也可用于大规模重组蛋白表达和病毒生产。
本文是一篇PEI转染试剂进行CHO细胞转染的说明书，主要介绍了转染需要用到的试剂和步骤。
一、所需材料
1.PEI转染试剂
2.37℃预热的CHO细胞培养基
备注：血清会抑制转染。请使用减血清，无血清(“SFM”)或化学成分限定(“CDM”)培养基。
3.含目标基因的转染级质粒DNA(pDNA)，浓度为1 μg/mL
4.CHO细胞，活细胞密度约为1.5-2.0×106cells/mL
二、操作步骤
1.转染前检测细胞密度和活力，活细胞密度约为1.5-2.0×106cells/mL，细胞活力大于95%。
2.用新鲜培养基将活细胞密度稀释至1.05×106cells/mL。
3.pDNA准备：每mL细胞培养物需要1.0 μg pDNA，用新鲜培养基稀释至20 μg/mL。
4.PEI转染试剂准备：每mL细胞培养物需要5 μLPEI转染试剂，用新鲜培养基稀释至75 μg/mL（最终培养体积为5%）。
5.将稀释后的pDNA和PEI转染试剂混匀后，室温孵育10min，使用前需要颠倒混匀一次。
6.每90 mL培养物加入10 mL pDNA/PEI混合物进行转染。
注意：混合时逐渐加入pDNA/PEI混合物。
7.37℃，5% CO2条件下培养细胞。
三、推荐用量
下表中列出了推荐试剂量。如果进行其他相似的转染(例如病毒转染)，建议在优化范围内对这些参数进行协同优化。
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参数
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优化范围
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PEI浓度
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3.5-6.5 mg/L终浓度
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DNA浓度
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0.75-1.50 mg/L终浓度
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PEI/DNA孵育时间
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5.0-15.0 min
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四、注意事项
1.如果使用补料、加强剂、补充剂或增强剂，可在转染后6小时的任何时间添加。
2.如果使用GFP对照，应在48小时后观察到超过70%的转染效率。
3.一般情况下，分泌蛋白在转染后5至7天达到最高水平。
