无血清、无饲养层培养已成为多能干细胞（hPSC）与间充质干细胞（MSC）工艺的主流，而玻连蛋白（Vitronectin）正是这一体系中被反复验证的最小基质。重组人玻连蛋白（rhVTN-N）序列与血浆来源完全一致，但无动物源风险，批间差异可控，可直接替代Matrigel，实现从科研到临床的无缝衔接。
一、作用机制
玻连蛋白通过RGD序列同时桥接细胞表面整合素αVβ3/αVβ5与培养皿表面，为干细胞提供“锚定-存活-自我更新”三级信号。其浓度窗口宽，0.5 μg/cm²即可形成单分子层，过量至5 μg/cm²亦不会引起分化，适合新手操作。
二、包被流程
1.选用组织培养级聚苯乙烯皿，避免低吸附表面。
2.用4 ℃保存的PBS（Ca²⁺/Mg²⁺无）将rhVTN-N稀释至5–10 μg/mL，轻柔混匀，避免涡旋起泡。
3.按1 mL/10 cm²加入皿底，室温静置1 h或4 ℃过夜；若当日使用，可在37 ℃孵育30 min加速吸附。
4.弃去剩余液体，无需洗涤，直接接种细胞。包被后皿可在4 ℃保存7天，使用前回温至室温即可。
三、接种与换液
hPSC：以EDTA传代后，用含ROCK抑制剂的无血清培养基重悬，按2×10⁴ cells/cm²接种；8–12 h后可见克隆贴壁，24 h换液去除抑制剂，此后每日全量换液。
MSC：胰酶消化后，按5×10³ cells/cm²接种；玻连蛋白对MSC促贴壁作用显著，2 h即可伸展，24 h后首次换液，维持倍增速度与传统血清体系一致。
四、传代与冻存
传代时，EDTA或温和细胞解离液均可，无需胶原酶；玻连蛋白层在EDTA作用下仍保持完整，可支持新一轮细胞贴壁，减少基质重复包被成本。冻存液中无需添加玻连蛋白，复苏后直接接种至已包被新皿，存活率稳定。
五、常见问题
1.细胞边缘发黑：多为包被浓度过低，提高至1 μg/cm²即可。
2.分化迹象：检查培养基是否缺bFGF或换液间隔过长，玻连蛋白本身不诱导分化。
3.皿底出现云雾状：系蛋白析出，改用无Ca²⁺/Mg²⁺ PBS稀释即可避免。
