一、SCF为何成为“造血扩增第一因子”
干细胞因子（Stem Cell Factor, SCF）通过结合c-Kit受体，激活JAK/STAT、PI3K/Akt及Ras/MAPK通路，维持造血干细胞（HSC）自我更新并抑制凋亡。重组人SCF蛋白无血清、无动物源，批间稳定，已替代传统条件培养基，成为体外扩增HSC的核心添加因子。
二、产品形式与活性单位
市售重组人SCF多为E.coli或CHO表达，经镍柱或离子交换两步纯化，纯度＞98%，内毒素＜0.1 EU/μg。活性以ED50界定：刺激TF-1细胞增殖，ED50≤5 ng/mL，实验室常用工作浓度50–100 ng/mL，可满足人、小鼠及NOD/SCID移植模型需求。
三、培养体系搭建
1.基础培养基：StemSpan SFEM或DMEM/F-12，含1% BSA、10 μg/mL胰岛素、200 μg/mL转铁蛋白，提供碳源与铁离子；无血清配方避免未知蛋白干扰移植后免疫表型分析。
2.细胞因子组合：SCF 100 ng/mL + FLT3-L 100 ng/mL + TPO 50 ng/mL，俗称“SFT”三因子，7天即可使Lin⁻CD34⁺细胞扩增5–10倍，且长期起始细胞（LTC-IC）保留率＞60%。
3.培养器皿：低氧（5% O₂）培养用24孔非贴附板，减少ROS产生；每孔500 μL体系，细胞密度1×10⁵ cells/mL，每日轻摇两次防止聚集沉降。
四、操作关键点
解冻：冻存HSC 37 ℃水浴90 s，立即加入10倍体积含DNase I（10 U/mL）的冷PBS，防止DMSO诱导聚集。接种：SCF需最后加入，避免提前吸附；培养第3天半量换液，补足SCF至终浓度，防止因子耗竭导致c-Kit下调。
传代：扩增7天细胞密度达8×10⁵ cells/mL时，1:2分孔，继续补因子；若做移植，第10天收获，PBS洗两遍去除因子，防止体内信号过强。
五、常见问题与解决
c-Kit表达下降：检查SCF浓度，低于20 ng/mL时受体内化；立即补加新鲜SCF，可逆性恢复表型。
细胞贴壁：板底未做非贴附处理，提前用2% BSA包被过夜；或更换商品化非贴附板。 活率低于80%：多为DMSO残留，延长洗涤步骤，或加入5 μM Z-VAD抑制凋亡。
