CHO（中国仓鼠卵巢）细胞是一种常用的哺乳动物细胞系，广泛应用于生物学研究和生物制药的生产。CHO细胞是一种理想的宿主，可用于生产复杂的重组蛋白质，如单克隆抗体和酶。这些蛋白质常用于治疗性药物、疫苗和诊断工具的开发。
（一）使用PolyToolTM CHO转染CHO细胞方法：
1.所需材料：
试剂（PolyToolTM CHO Transfection Reagent、PolyToolTM CHO Medium、PolyToolTM Enhance S1、PolyToolTM Enhance S2、葡萄糖溶液（500 g/L））
宿主细胞（例：ExpiCHO-S，瞬转前1~2天接种，瞬转当天密度~6×106cells/mL，倍增时间~18 h）
表达质粒（例：CMV启动子驱动的Trastuzumab表达质粒，浓度1 μg/μL）
培养容器（例：125 mL摇瓶）
2.转染（高产方案，以25mL瞬转表达体系为例）
（1）换液：200 g离心5 min收集ExpiCHO-S细胞，换液至37.0°C预热好的PolyToolTM CHO Medium中，同时调整细胞密度到6×106cells/mL。细胞摇床设定为37.0 °C，8.0% CO2，120 rpm，80% RH。
（2）复合：取2份瞬转体积5%的PolyToolTM CHO Medium（1.25 mL×2），分别用于稀释25 μg质粒DNA和62.5 μL PolyToolTM CHO Transfection Reagent，质量比DNA: PolyToolTM CHO Transfection Reagent = 1: 2.5。稀释后立即混匀，室温孵育10 min（特别注意孵育时间过久或过短都会显著降低蛋白表达）。
（4）转染后18-22 h（Day1）：补料3% Enhance S1和0.3% Enhance S2，取样计数、测生化。降温至32.0 °C培养，其余参数不变。
（5）转染后Day3：取样计数、测生化，补料3% Enhance S1和0.3% Enhance S2。Enhance S1含糖量为50 g/L，据此估算补料后的葡萄糖浓度，继续添加葡萄糖溶液使之超过6 g/L为宜。
（6）转染后Day5、7、10：同Day3操作。
（7）转染后Day12：取样计数、测生化，收获上清。
（二）常见问题及解决方法
1.转染效率低
如果细胞转染效率偏低，则可能由以下原因造成：
（1）细胞转染前结团或存活率低于95%；
（2）细胞增殖速度过慢；
（3）DNA质粒纯度较低，或含有内毒素、蛋白质或其它影响细胞转染的物质；
（4）需要调整DNA和转染试剂用量。
2.转染后细胞存活率降低
转染后细胞活率有所降低，属于正常现象，但转染7天后的细胞存活率一般仍可维持在80%以上。
3.转染后细胞结团
若转染后出现松散的细胞结团现象，可能是细胞成团粘附于瓶壁上并在震动中脱落下来所致，这种情况多数可能是摇瓶未清洗干净或细胞存活率低所引起。若转染后细胞结团现象比较严重，可在转染1天后加入抗结团剂。
