PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit

产品详情

产品介绍

PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit（CHO细胞专用转染试剂盒）适用范围：CHO细胞的高密度无血清悬浮培养、DNA 瞬时转染及蛋白表达。

该试剂盒包括下列试剂：

（1）PolyTool™ CHO Transfection Reagent （悬浮CHO细胞转染试剂）；

（2）PolyTool™ CHO Medium（化学限定CHO 细胞无血清细胞培养液）；

（3）PolyTool™ CHO S1（化学成分限定的、高浓度营养成分的补料 1）；

（4）PolyTool™ CHO S2（化学成分限定的、高浓度营养成分的补料 2）。

PolyTool™ CHO Transfection Reagent 配合PolyTool™ CHO Medium、PolyTool™ CHO S1及PolyTool™ CHO S2使用，可大幅度提高重组蛋白的表达产量。

实验所需设备：生物安全柜、离心机、二氧化碳培养箱摇床（37 ℃及 32 ℃）。

1.细胞接种（以25mL体系为例）：

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议接种密度为2.5~3×10⁶ cells/mL，待第二天细胞密度达到6×10⁶ cells/mL左右，活性大于95%时进行转染。

2.瞬时转染：

建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:2~1:4之间。具体步骤如图1所示（以1:3为例）：

（1）使用本样品前涡旋混匀5秒，使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀释75 μL的转染试剂，并吹打均匀；

（2）使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀释25 μg质粒，并吹打混匀；

（3）将(1)和(2)所述溶液混合均匀；

（4）将(3)所述混合溶液室温静置孵育10~15 min；

（5）将(4)中的复合物溶液加入25 mL的细胞培养体系中，放回摇床中，在37 ℃、震荡速度120 rpm下继续培养。

3.产物表达与检测：

（1）转染24小时、72小时、120小时、168小时后加入3%（0.75 mL/25 mL）PolyTool™ CHO S1补料、0.3%（75 μL/25 mL）PolyTool™ CHO S2补料。

若想获得高表达效果，24 小时添加完补料后，将细胞转移至32℃摇床培养箱中进行低温表达（葡萄糖控制在 4~8 g/L）。

（2）转染后第 6~8 天测定产物表达量。大多数蛋白的合成在转染后第7天左右可达到最高值，客户可根据细胞状态及表达量选择适宜的收获时间。