PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit

表达质粒（例：CMV启动子驱动的Trastuzumab表达质粒，浓度1 μg/μL）

培养容器（例：125 mL摇瓶）
2.转染（以25mL瞬转体系为例，标准方案）
（1）换液：300 g离心5 min收集ExpiCHO-S细胞，换液至37°C预热好的PolyTool^TM CHO Medium中，同时调整细胞密度到6×10⁶ cells/mL。细胞摇床设定为37°C，8.0% CO₂，120 rpm，80% RH（相对湿度）。
（2）复合：

①取1.25 mL PolyTool^TM CHO Medium（占最终表达体积的5%）稀释25 μg质粒DNA（单质粒系统质量为25 μg，双质粒系统总质量为25 μg），轻柔混匀；

②另取1.25 mL PolyTool^TM CHO Medium，加入375 μL室温融解的Transfection Reagent Diluent和62.5 μL PolyTool^TM CHO Transfection Reagent（确保总DNA与转染试剂的质量比为1:2.5），轻柔混匀；

③将转染试剂稀释液缓慢加入质粒稀释液中，立即轻柔混匀，室温孵育10 min使转染复合物充分形成（复合的时候由于特异的组装结构可能会出现浑浊现象，不影响使用效果，请放心使用）。
（3）转染：从摇床中取出第1步换液培养的ExpiCHO-S，加入孵育好的DNA/PolyTool^TMCHO Transfection Reagent复合物，完成转染。放回摇床继续培养。
（4）转染后18-22 h（Day1）：补料2 mL Enhance S1（占最终表达体积的8%）、75 μL Enhance S2（占最终表达体积的0.3%）和250 μL Expression enhancer（占最终表达体积的1%），取样计数、测生化。
（5）之后每隔三天（若表达7天则在Day4）：补料2 mL Enhancer S1（占最终表达体积的8%），取样计数、测生化。
（6）转染后Day7：取样计数、测生化，收获上清。