293细胞转染是一种常用的细胞生物学技术，用于将外源DNA或RNA导入293细胞。这种方法广泛应用于研究基因表达、蛋白质功能以及药物筛选等领域。
（一）使用PolyToolTM 293转染293细胞流程
1.细胞接种（以25 mL体系为例）
根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议 接种密度为1×106 cells/mL，待第二天细胞密度达到2×106 cells/mL左右，活性大于95%时进行转染。
2.瞬时转染
建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:3~1:5之间。
（1）使用本样品前涡旋混匀5秒，使用1.25 mLPolyToolTM 293 Medium稀释100 μL的转染试剂，并吹打均匀；
（2）使用1.25 mL PolyToolTM 293 Medium稀释25 μg质粒，并吹打混匀；
（3）将（1）和（2）所述溶液混合均匀；
（4）将（3）所述混合溶液室温静置孵育10~15 min；
（5）将（4）中的复合物溶液加入25 mL的细胞培养体系中，放回摇床中，37 ℃、震荡速度120 rpm下继续培养。
3.产物表达与检测
（1）转染24小时、72小时、120小时、168小时后加入3%的293细胞蛋白表达补料B和0.3%的293细胞蛋白表达补料C。
（2）转染后第5~7天测定产物表达量。多数蛋白的合成在转染后第5天左右可达到最高值，客户可根据细胞状态及表达量选择适宜的收获时间。
1.转染效率低
如果细胞转染效率偏低，则可能由以下原因造成：
（1）细胞转染前结团或存活率低于95%；
（2）DNA质粒纯度较低，或含有内毒素、蛋白质或其它影响细胞转染的物质；
（3）需要调整DNA和转染试剂用量。
2.转染后细胞存活率降低
转染后细胞活率有所降低，属于正常现象，但转染5天后的细胞存活率一般仍可维持在70%以上。客户可根据细胞活率决定转染后的细胞培养天数，尽量在细胞活率降低至60%前收样。
3.转染后细胞结团
若转染后出现松散的细胞结团现象，可能是细胞成团粘附于瓶壁上并在震动中脱落下来所致，这种情况多数可能是摇瓶未清洗干净或细胞存活率低所引起。若转染后细胞结团现象比较严重，可在转染1天后加入抗结团剂。
4.表达量低
若出现蛋白表达量低，建议添加补料时可同时添加4 mM的L-Glutamine以及5 g/L的葡萄糖。
