PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit

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PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit（293细胞专用转染试剂盒）适用范围：HEK293细胞悬浮培养、其他HEK293细胞的高密度悬浮培养、DNA瞬时转染及蛋白表达。

该试剂盒包括下列试剂：

（1）PolyTool™ 293 Transfection Reagent （悬浮293细胞转染试剂）；

（2）PolyTool™ 293 Medium（化学限定293 细胞无血清细胞培养液）；

（3）PolyTool™ 293 B（化学成分限定的、高浓度营养成分的补料 1）；

（4）PolyTool™ 293 C（化学成分限定的、高浓度营养成分的补料 2）。

PolyTool™ 293 Transfection Reagent 配合PolyTool™ 293 Medium、PolyTool™ 293 B及PolyTool™ 293 C使用，可大幅度提高重组蛋白的表达产量。

实验所需设备：生物安全柜、离心机、二氧化碳培养箱摇床（37 ℃）。

1.细胞接种（以25mL体系为例）：

根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议接种密度为 1×10⁶ cells/mL，待第二天细胞密度达到2×10⁶ cells/mL左右，活性大于95%时进行转染。

2.瞬时转染：

建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为1:3~1:5之间。具体步骤如图1所示（以1:4为例）：

（1）使用本样品前涡旋混匀5秒，使用1.25 mLPolyTool™ 293 Medium稀释100 μL的转染试剂，并吹打均匀；

（2）使用1.25 mL PolyTool™ 293 Medium稀释25 μg质粒，并吹打混匀；

（3）将(1)和(2)所述溶液混合均匀；

（4）将(3)所述混合溶液室温静置孵育10~15 min；

（5）将(4)中的复合物溶液加入25 mL的细胞培养体系中，放回摇床中，在37 ℃、震荡速度120 rpm下继续培养。

3.产物表达与检测：

（1）转染24小时、72小时、120小时、168小时后加入3%（75 mL/100mL）PolyTool™293 B，0.3%（75 μL/25 mL）PolyTool™ 293 C。

（2）转染后第5~7天测定产物表达量。多数蛋白的合成在转染后第5天左右可达到最高值，客户可根据细胞状态及表达量选择适宜的收获时间。

图1 细胞转染示意图