PolyTool™ mRNA Transfection Reagent in vivo

产品详情

转染须知

1.转染所用试剂为PolyTool™ mRNA Transfection Reagent in vivo；

2.所用实验动物为C57BL/6小鼠；

3.肌肉注射和静脉注射所用的注射器推荐为1 mL的胰岛素注射器；

4.活体成像所用设备为Perkin Elmer的Lumina II/Lumina III；

5.值得注意的是，本转染试剂在静脉注射具有优异的脾脏靶向能力，通过肺部给药的方式也具有优异的肺部表达效果。

实验流程

1.载mRNA纳米颗粒的制备

取两个无菌无酶1.5 mL离心管，其中一个离心管加入5 μL 1 mg/mL的Luc mRNA，并用5 %的葡萄糖溶液补至100 μL，混匀；另一个离心管加入25 μL 1 mg/mL的 PolyTool™ mRNA Transfection Reagent in vivo并用5 %的葡萄糖溶液补至100 μL，混匀；将两个离心管中的溶液快速混合到一起，涡旋10 s，静置10 min 即可得到200 μL载mRNA纳米颗粒溶液。

2.载mRNA纳米颗粒的体内给药

将得到的200 μL纳米颗粒吸入1 mL胰岛素注射器中，在C57BL/6小鼠的大腿内侧进行肌肉、静脉或肺部给药（肺部给药最多40 μL）注射。注射完毕后确定小鼠无异常后将小鼠放回笼中。
3.活体成像检测Luc mRNA的表达

在肌肉注射纳米颗粒6 h，12 h，24 h，48 h，72 h后通过Perkin Elmer的Lumina II或Lumina III评价材料的体内转染性能。应提前对小鼠的成像部位进行剃毛，并配置荧光素钾盐溶液备用（每只鼠3 mg，溶于200 μL PBS溶液中，现配现用）。将荧光素钾盐溶液通过腹腔注射给小鼠，静置5-10 min后进行活体成像。采用生物发光模式，曝光时间为60 s，可采用连续拍摄模式，每间隔1 min拍摄一次，直到获取最大的发光值。