动物组织解离是细胞生物学和医学研究中的基础技术，旨在将完整的组织分离为单个细胞或细胞团，用于细胞培养、基因分析或药物筛选等场景。本文系统梳理常见解离方法及其适用场景，助力科研工作者选择最优方案。
一、常用解离方法分类
1.机械分离法
通过物理手段（如匀浆器、筛网过滤）破碎组织，适用于结缔组织较少的软组织（如肝、脾）。优点在于操作简单、成本低，但细胞损伤风险较高。
2.酶消化法
利用胰蛋白酶、胶原酶等分解细胞间质蛋白，适用于肌肉、肿瘤等致密组织。需控制酶浓度（0.1%-0.25%）和孵育时间（30-60分钟），避免过度消化导致细胞膜破裂。
3.化学解离法
使用螯合剂（如EDTA）结合钙离子破坏细胞连接，常与酶消化法联用，提升上皮组织解离效率。
4.低温梯度法
通过反复冻融弱化细胞间连接，适用于神经组织等敏感样本，但对设备要求较高。
准备工作：水浴锅设置到37℃、配制含5% FBS的PBS。
1.取一个5 mL离心管，加入240 µL哺乳动物组织通用解离液和2760 µL的RPMI 1640培养基，混匀。
2.将组织样本用PBS清洗干净，剪碎，并转移到第1步准备好的溶液中，摇晃混匀。
3.放在37℃水浴锅中0.5 h ~ 2 h。消化过程中，每隔3 ~ 5 min摇晃混匀。
4.不同类型、状态的组织消化时间不同，每隔一定的时间质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。
5.消化完成后，用70 μm细胞筛进行过滤，收集滤液于新的15 mL离心管中。
6.加3 mL RPMI 1640培养基于消化的离心管中，上下颠倒涮洗管壁，涮洗液同样经过同一个70 μm细胞筛进行过滤，收集滤液于第5步的15 mL离心管中。
7.重复步骤6两次，共洗3次，共收集滤液12 mL。
8.将收集液于4℃，300 ×g离心5 min，弃上清。
9.用5 mL含5% FBS的PBS重悬沉淀，吹打混匀，4℃，300 ×g离心5 min，弃上清。
10.重复步骤9一次，共清洗两次。
11.用50 µL ~ 2 mL含5% FBS的PBS重悬沉淀，重悬液的体积根据所需的细胞浓度进行调整。
12.用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录。
13.质控结束后请立即进行后续实验。
备注：1.若得到的细胞悬液中有红细胞，按需决定是否进一步去除红细胞。
2.DMEM培养基可替代RPMI 1640培养基。
三、应用领域解析
1.肿瘤研究：原代肿瘤细胞培养需联合酶消化与机械分离；
2.干细胞分离：采用温和解离法保留细胞表面标记物；
3.器官芯片构建：高活性细胞悬液是3D培养的基础。
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