在基因功能研究和重组蛋白表达领域，细胞转染技术是核心实验手段之一。PEI（聚乙烯亚胺）线性转染试剂作为一种非病毒基因递送系统，凭借其高效性、低毒性和经济性，已成为实验室常用工具。本文将从作用原理、操作流程及优化策略展开，为科研工作者提供实用参考。
一、PEI线性转染试剂的作用机制
PEI是一种阳离子聚合物，其线性结构通过静电作用与带负电荷的DNA结合，形成稳定的纳米颗粒复合物。当复合物接触细胞膜时，通过内吞作用进入细胞。在溶酶体酸性环境下，PEI的质子海绵效应促使溶酶体破裂，释放DNA至细胞质，最终进入细胞核完成基因表达。相较于支链型PEI，线性结构具有更优的电荷密度和更低的细胞毒性。
二、标准实验操作流程
1.试剂配制：将PEI粉末溶于无菌去离子水（pH 7.0），终浓度为1 mg/mL，经0.22 μm滤膜除菌后分装保存。
2.DNA-PEI复合物制备：按N/P比（氮/磷摩尔比）4:1~8:1混合DNA与PEI，室温静置15-20分钟。
3.细胞转染：将复合物加入含10%血清的培养基，作用4-6小时后更换新鲜培养基。
4.表达检测：转染24-72小时后通过荧光显微镜、Western blot或qPCR评估效率。
三、关键优势与应用场景
四、实验优化与注意事项
1.N/P比优化：通过预实验确定细胞系特异性比例，过高会导致毒性，过低则影响转染效率。
2.细胞密度控制：贴壁细胞建议在60%-80%融合度时转染。
3.质量控制：使用内毒素检测试剂盒确保PEI纯度（建议<0.1 EU/mg）。
4.毒性处理：若出现细胞皱缩，可添加2-4 mM谷氨酰胺增强代谢。
