1.siRNA设计与选择
靶基因选择：选择合适的靶基因并设计相应的siRNA。确保靶基因序列与siRNA的结合位点具有高特异性，避免脱靶效应。
siRNA序列优化：选择合适的siRNA序列，避免选择与其他基因高度相似的序列，从而最大限度减少脱靶的可能性。
细胞状态：确保细胞处于健康状态，且没有其他污染。转染时，细胞应处于对数生长期，通常在70%-80%汇合度时转染效果最佳。
细胞密度：转染时的细胞密度直接影响转染效率。过低的细胞密度可能导致转染效率低下，而密度过高则可能抑制细胞增殖，降低转染效果。通常建议细胞接种时的密度保持在60%-80%的汇合度。
转染前准备：转染前24小时，可以减少使用含有抗生素的培养基。确保细胞在转染前未受到药物、毒素或其他实验操作的影响。
转染过程中使用无血清培养基：大多数转染试剂推荐在无血清培养基中与siRNA形成复合物，这有助于提高转染效率，减少血清对转染试剂的影响。转染完成后，通常可补充培养基。
转染时间：转染的时间通常为4-24小时，根据实验需求灵活调整。一般而言，转染4-6小时后，应更换为含血清的培养基，以减少转染试剂对细胞的毒性影响。
荧光标记：为便于观察转染效果，可以使用荧光标记的siRNA进行转染，并通过荧光显微镜或流式细胞仪评估转染效率。
对照组设置：设立阴性对照（如非靶向siRNA）和阳性对照（如已知有效的siRNA）组，以确保实验的可靠性和对照效果。
