在探索生命奥秘的分子生物学领域,每一步实验的成功都始于样品的完整性。从细胞裂解到核酸纯化,PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)以其稳定的生理环境模拟能力,成为样品制备流程中无可替代的关键试剂。
一、保障样本初始状态:生理环境的精准模拟
·渗透压平衡:PBS的渗透压(~290 mOsm/kg)精确匹配哺乳动物生理环境,有效保护细胞在初始洗涤或悬浮过程中的形态及膜结构完整性。
·pH稳定护航:恒定pH值(7.2 - 7.4)是维持生物分子天然构象的基础。PBS能有效中和组织样本中的酸性代谢产物,防止核酸(尤其是RNA)在样品获取阶段的酸水解降解。
·温和洁净:作为温和的洗涤液,PBS高效去除组织样本或细胞沉淀中的培养基残留、血清蛋白及其他干扰杂质,同时最大限度减少目标分子的损失或损伤,为后续裂解纯化奠定纯净基础。
二、裂解前处理:为高效释放核酸铺路
·组织均质化介质:在机械或酶法处理组织样本时,PBS常作为匀浆缓冲液的基础组分。其生理环境能保持细胞相对稳定,促进均匀破碎,提高后续裂解效率。
·细胞清洗标准化:培养细胞裂解前,PBS洗涤是去除残余血清(含RNase及蛋白酶)和培养基成分的标准步骤。对于贴壁细胞,不含钙镁离子的DPBS能有效促进细胞解离。
三、纯化过程的基石:平衡与清洗
·离心柱平衡液:硅胶膜柱核酸纯化体系中,PBS常用于平衡层析柱,确保膜结合环境处于最适pH与离子强度,显著提升核酸的结合效率与得率。
·洗涤杂质去除:在核酸结合到膜上后,包含乙醇的PBS洗涤液能有效去除残留的蛋白质、盐离子、代谢物及细胞碎片等杂质,同时保持核酸紧密结合状态,提高最终产物的纯度。
·沉淀物清洗:在传统的酚氯法提取或乙醇沉淀步骤中,PBS(常与乙醇混合)用于清洗核酸沉淀,去除残留盐分和有机溶剂,确保下游应用(如PCR、测序)不受抑制物干扰。
四、样品保存与定量:可靠性的延续
·短期保存载体:纯化后的核酸沉淀或某些中间样品,可短暂溶解或悬浮于PBS中进行短期保存或运输,其温和特性有助于维持核酸稳定性。
·浓度测定稀释液:PBS是稀释核酸样品进行分光光度定量(如NanoDrop)的理想选择,其本身在260/280 nm处吸光度极低,确保浓度和纯度(A260/A280比值)检测结果的准确性。
中科百抗提供高品质、严格无菌无酶认证的传统PBS(0.01M磷酸盐, 0.0027M氯化钾, 0.137M氯化钠, pH 7.4)及DPBS(不含钙镁离子)缓冲液产品:
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