作为细胞实验室最常用的基础试剂，磷酸盐缓冲液（PBS）看似简单却贯穿培养全流程。其功能远非“冲洗”二字可概括，精准应用能显著提升实验可重复性。本文将系统解析PBS的十大核心功能及操作规范。
一、细胞培养前处理
1.培养器皿包被预处理
-功能：稀释ECM蛋白（如胶原、多聚赖氨酸）并浸润培养皿表面
-要点：用无菌PBS按1:50~1:100稀释包被液，37°C孵育1小时后需彻底吸除，避免残留影响细胞贴壁
2.培养基/试剂稀释溶剂
-功能：维持渗透压（~290 mOsm/kg）与pH值（7.2-7.4）
-要点：
·配制胰酶消化液（如0.25% Trypsin-EDTA）
·溶解无血清刺激因子（避免血清干扰）
·不可替代培养基（缺乏营养物）
二、细胞操作过程应用
1.消化前的无离子清洗
-功能：清除残留血清（含蛋白酶抑制剂）及Ca²⁺/Mg²⁺
-要点：
·必须选用无Ca²⁺/Mg²⁺ PBS（DPBS⁻/⁻）
·37°C预热，轻柔清洗2次×30秒（防止细胞脱落）
2.消化中止保护剂
-功能：稀释胰酶并中和其活性
-要点：加入含10% FBS的PBS（体积≥胰酶10倍），立即混匀
3.细胞洗涤与离心
-功能：移除死细胞碎片、残留药物及代谢废物
-要点：
·离心参数：4°C，1500 rpm×5分钟
·重悬时避免漩涡振荡（机械损伤），轻柔吹打10次
4.原位细胞固定
-功能：保持细胞形态，终止生化反应
-要点：
·预冷4°C PBS清洗后，加入4%多聚甲醛（PBS配制）
·固定时间严格按实验需求（通常15-30分钟）
三、培养后处理与质控
1.免疫染色清洗基底
-功能：去除未结合抗体，降低背景噪音
-要点：
·含0.1% Tween-20的PBS（PBST）提高清洗效率
·每次浸泡5分钟×3次，震荡轻摇
2.细胞计数缓冲介质
-功能：稀释细胞悬液并维持等渗环境
-要点：
·台盼蓝染液按1:1与PBS混合使用
·计数需在10分钟内完成（避免渗透压损伤）
3.冻存前残留血清清除
-功能：减少DMSO渗透压应激
-要点：离心后以PBS重悬细胞，再与冻存液混合
4.仪器维护与校准
-功能：流式细胞仪/显微设备冲洗液
-要点：
·使用0.22 μm过滤除菌的新鲜PBS
·定期更换管路储存液（每周1次）
·PBS贯穿细胞实验的每个环节，其离子组成、渗透压精度与无菌状态直接决定数据可靠性。牢记以下黄金原则：
1.区分含离子/无离子PBS（消化前必选DPBS⁻/⁻）
2.严格预温/预冷（避免温度休克）
3.控制接触时间（清洗≤5分钟，固定按需计时）
掌握这些细节，方能最大化发挥PBS的“隐形守护”价值。
