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流程环节 |
PBS作用 |
参数要求 |
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转膜后清洗 |
移除残留SDS，防止高背景 |
震荡浸洗3×5分钟（0.1% Tween-20） |
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抗体孵育前平衡 |
维持膜湿润，防止蛋白变性 |
pH 7.4±0.1（偏差>0.2导致条带扭曲） |
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ECL显影前终止 |
稀释发光液，延长信号线性期 |
冰预冷PBS冲洗10秒 |
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流程环节 |
PBS作用 |
致命错误 |
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包被后封闭 |
稀释BSA/脱脂奶（5% in PBS） |
使用TBS替代（离子强度不足） |
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洗板 |
移除未结合物，降低背景 |
洗液pH>8.0（抗体解离↑50%） |
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终止反应稀释 |
中和HRP活性，稳定OD值 |
未过滤含沉淀PBS（孔间差异↑30%） |
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流程环节 |
PBS作用 |
优化方案 |
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抗原修复后冷却 |
防止组织脱片，终止热诱导 |
预冷4°C PBS浸泡（≥10分钟） |
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一抗/二抗清洗 |
清除多余抗体，减少非特异结合 |
含0.05% Tween-20（浸润>3分钟×3次） |
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DAB显色终止 |
淬灭过氧化物酶活性 |
流水冲洗后PBS浸泡固定 |
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应用场景 |
添加剂 |
浓度 |
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WB洗膜 |
Tween-20 |
0.05–0.1% |
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IHC清洗 |
Triton X-100 |
0.1–0.3%（透化专用） |
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ELISA封闭 |
BSA |
3–5% |
