在基因功能研究与疾病治疗领域，siRNA（小干扰RNA）技术凭借其精准的基因沉默能力，成为生命科学研究的核心工具之一。然而，如何将siRNA高效递送至靶细胞并实现稳定表达，始终是实验成功的关键。聚乙烯亚胺（Polyethylenimine, PEI）作为经典的非病毒转染试剂，能否适配siRNA转染需求？本文将深入解析其作用机制与优化策略。
一、PEI作为siRNA转染试剂的可行性
PEI是一种阳离子聚合物，其分子链上的氨基基团可通过静电作用与带负电的siRNA结合，形成稳定的纳米复合物。这些复合物通过细胞膜的内吞作用进入细胞后，PEI的“质子海绵效应”可促进溶酶体逃逸，从而释放siRNA至细胞质，启动基因沉默过程。相较于脂质体转染试剂，PEI具有成本低、适用范围广（尤其对难转染细胞）、可大规模制备等优势，是siRNA递送的理想候选。
二、PEI-siRNA转染的核心优化策略
1.浓度梯度测试：PEI与siRNA的比例（N/P比）直接影响复合物粒径和转染效率。建议通过预实验确定最佳N/P比（通常为5:1至15:1），避免过量PEI引发细胞毒性。
2.细胞类型适配性：悬浮细胞（如HEK293）通常比贴壁细胞更易转染，若用于原代细胞或干细胞，需结合血清预处理或使用低分子量PEI（如25 kDa）降低毒性。
3.血清兼容性：PEI转染可在含血清培养基中进行，但需确保复合物形成阶段使用无血清缓冲液（如Opti-MEM），以维持复合物稳定性。
三、PEI转染的注意事项与替代方案
尽管PEI具备显著优势，其细胞毒性仍不可忽视。若实验中出现细胞存活率低于70%，可尝试缩短转染时间（4-6小时）或换用支链型PEI降低毒性。对于高灵敏度实验，建议联合使用PEI与靶向配体（如叶酸或抗体），提升siRNA的靶向递送效率。此外，脂质纳米颗粒（LNP）或电穿孔技术可作为补充方案，满足特定场景需求。
