在生命科学研究与细胞治疗开发中，原代细胞和悬浮细胞的转染效率低下长期制约实验进展。这类细胞因膜结构特殊、增殖缓慢或缺乏贴附点，对传统转染方法（如脂质体）响应极差。本文将系统性解析高效转染策略，助您突破技术瓶颈。
一、原代细胞转染：精准递送与低毒性平衡
原代细胞直接分离自生物组织，更贴近体内状态，但脆弱易凋亡。解决方案包括：
电穿孔优化：采用低电压多脉冲参数（如120-150V, 20ms），搭配专用缓冲液提升DNA/RNA递送效率；
病毒载体改造：慢病毒载体（LV）或腺相关病毒（AAV）可实现长期稳定表达，适用于神经元、免疫细胞等；
纳米材料递送：阳离子聚合物（如PEI）或脂质纳米颗粒（LNP）通过表面修饰靶向细胞膜，降低细胞毒性。
二、悬浮细胞转染：突破无贴壁依赖瓶颈
悬浮细胞（如Jurkat、THP-1）因缺乏贴壁点，需特殊转染体系：
非病毒载体试剂：如阳离子聚合物试剂（PEI），通过电荷吸附形成复合物穿透细胞膜；
电转参数定制：针对不同细胞调整电压（如HEK 293悬浮细胞：250V, 10ms）；
稳定株筛选：利用CRISPR/Cas9载体整合目标基因，结合抗生素筛选获得高表达株系。
三、前沿技术：纳米载体与微流控芯片
为提升转染可控性，新兴技术提供新思路：
-磁性纳米颗粒：通过外磁场精准定位递送，减少载体用量；
-微流控电转芯片：在微通道内实现单细胞精准转染，适用于稀有样本（如循环肿瘤细胞）。
攻克难转染细胞的核心在于递送载体优化与细胞状态调控。通过定制化方案，原代与悬浮细胞的转染效率可提升3-5倍，为基因治疗、抗体生产提供可靠工具。
