Mar.2024 26
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1640培养基的配制方法
细节

RPMI 1640,一种广泛应用于细胞培养的培养基,最初由Moore等人于1966年在Roswell Park Memorial Institute研发而成,因此得名。其最初用于淋巴细胞的培养,但现已发现适用于多种哺乳动物细胞,包括HeLa细胞、Jurkat细胞、MCF-7细胞、PC12细胞、PBMC细胞、星形胶质细胞和癌细胞等。

RPMI 1640培养基适用范围广泛,可用于体外培养多种哺乳动物细胞,如人类、小鼠、猴等。它含有多种必需营养成分,为细胞提供了合适的营养物质和pH值,有助于保持细胞的健康生长和增殖。

那么,我们来看一下RPMI 1640培养基的配制方法吧,以配制500mLRPMI 1640培养基为例。

1.实验试剂与用具的准备:

  • 500mL烧杯

  • 碳酸氢钠

  • 超纯水

  • RPMI 1640培养基干粉

  • 天平

  • 玻璃棒或磁力搅拌器

  • 0.2μm滤膜

2.配制RPMI 1640培养基

1)称取适量RPMI 1640培养基干粉至500mL烧杯中,加入300mL超纯水,用玻璃棒或磁力搅拌器搅拌30分钟,使其充分溶解。

2)待溶液澄清后,加入1.0g碳酸氢钠(分析纯),继续搅拌5分钟,直至完全溶解。

3)加入超纯水至500mL,使容量定容。

4)必要时使用1mol/LNaOH1mol/L的HCl调整pH值至7.20-7.30。由于过滤会导致培养基的pH值稍微偏高,因此在此步骤中,需要将目标pH值(7.20-7.40)调低一些。

5)使用0.2μm的滤膜进行正压过滤除菌(注意进行无菌操作)。

6)过滤结束后,可以取少许液体培养基进行菌检。待检测合格后再使用。此时,液体培养基的保质期为1年,储存条件为2~8℃。根据细胞的生长特性,可向培养基中添加双抗体、胎牛血清或生长因子等成分。

需要注意的是:RPMI 1640培养基含有多种细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等成分,但不含蛋白质、脂质或任何生长因子。在使用时,需要配合血清或无血清添加物,通常添加10%的胎牛血清(FBS)。由于使用了碳酸氢钠缓冲系统,因此需要在5-10%CO2环境中维持生理pH值。