一、NeptryTM消化液简介
中科百抗NeptryTM消化液是一种胰蛋白酶类似物(Trypsin Like Enzyme),是一种通过生物工程制备的非动物源性重组蛋白酶,与胰蛋白酶有相似的解离动力学,稳定性更高,纯度更好,消化更温和,细胞毒性更低。目前主要应用于细胞培养中,在赖氨酸和精氨酸的C末端进行切割肽键,可以替代猪或牛胰蛋白酶(Trypsin)对贴壁细胞的消化解离。生物制药中,GMP级别的NeptryTM消化液能够为疫苗生产、病毒载体生产提供高质量和高性价比的贴壁细胞消化解决方案。NeptryTM消化液在保证消化效果的基础上,相较于传统胰蛋白酶,纯度更高,分子更加稳定,活性保持更加优异。
二、使用NeptryTM消化液注意事项
1、在使用NeptryTM消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染;
2、消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差,做流式时的CD Marker也可能会下降;
3、消化液进行分装时尽量分装成多瓶,并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀,多次使用同一瓶消化液反复冻融会降低消化效果并可能造成污染;
4、低血清或无血清的环境下,弱贴壁细胞及干细胞在传代过程中的消化,其消化效果主要与pH值、温度、消化液浓度、组织块大小和硬度有关。
5、酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素),为避免固醇类反应,培养细胞特别是哺乳类细胞时,需用不加酚红的培养基。
三、NeptryTM消化液测试数据
NeptryTM消化液适用于组织块、贴壁细胞、微载体方法培养的消化解离和原代细胞的获取以及疫苗生产过程中一些贴壁宿主细胞的消化,该产品对细胞较胰蛋白酶更加温和,最大限度减少对细胞的伤害,使用过程中不需要胰酶抑制剂中和活性,可对胰蛋白酶产品以及胰酶类似物等同类产品无缝切换。NeptryTM消化液细胞实验数据(T25培养瓶)如下:
表1:分别消化HEK293FT细胞和B16F10细胞,细胞活率数据
表2:分别消化HEK293FT细胞和B16F10细胞,消化结果数据
从消化实验数据来看,NeptryTM消化液效果优异,细胞24h贴壁状态良好。