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PEI转染试剂在慢病毒/AAV包装中的关键作用

Sep 22nd,2025 57 浏览量

在基因治疗与细胞治疗领域,慢病毒(LV)和腺相关病毒(AAV)是核心递送工具,但其生产面临转染效率低、空壳率高、批次不稳定三大瓶颈。中科百抗Bestop PEI线性转染试剂(货号BM350101)通过精准N/P比(氮磷比)控制和低毒性设计,成为病毒包装的"黄金标准"。  
一、科学机制:为何PEI是病毒包装的优选?  
病毒包装依赖三重质粒共转染(包膜质粒+包装质粒+基因组质粒),传统钙转染或脂质体法存在明显缺陷:  
-钙转染:效率20%,毒性高(细胞存活率60%)  
-脂质体:成本高,血清敏感性高  
PEI的核心优势:  
1.阳离子聚合物特性:通过静电作用高效压缩大片段DNA(>10 kb),形成80-100 nm稳定复合物  
2.质子海绵效应:缓冲内体酸性环境,促进DNA逃逸,提升功能性病毒颗粒比例  
3.悬浮培养适配性:直接转染HEK293T/HEK293悬浮细胞,无需贴壁培养  
二、标准化操作流程(以AAV生产为例)
1.转染准备:  
-HEK293细胞密度1.2×10⁶ cells/mL(存活率>95%)  
-三质粒体系(pAAV-RC/pHelper/pGOI)总量3 μg/mL培养物  
2.复合物形成:  
-DNA+即用型PEI1 μg:3 μL)→室温静置10 min  
3.转染执行:  
-混合物体积占培养基10% → 轻柔混匀后孵育  
4.收获与纯化:  
-转染后72 h收集细胞 → AAV滴度提升50%vs.分枝化PEI
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