PEI转染试剂广泛应用于多种细胞系的DNA转染，包括HEK-293、HEK-293T、和CHO细胞等，也可用于大规模重组蛋白表达和病毒生。PEI转染试剂具有高效、低毒性、稳定性强的特点，适用于许多细胞类型，甚至一些难以转染的细胞。

下面是贴壁细胞使用PEI转染试剂转染的操作步骤：

一、所需材料

1.PEI转染试剂。

2.37℃预热的HEK293表达培养基或DMEM。

备注：血清会抑制转染。请使用减血清，无血清或化学成分限定培养基。

3.含目标基因的转染级质粒DNA(pDNA)，浓度为1 μg/mL。

二、操作步骤

（一）转染前

转染前一天按照5×10⁴ cells/cm²的细胞密度进行接种，使其在转染当天达到50-80%汇合度。

（二）转染

1.测量细胞密度，根据细胞汇合度确定转染参数。

2.在5%的DMEM或细胞培养基中，每10⁶ cells稀释1.0 μg pDNA，混匀。

3.在5%的DMEM或细胞培养基中，每10⁶ cells稀释3.0 μg PEI转染试剂。混匀。

4.将稀释后pDNA和PEI转染试剂混合，涡旋混匀或上下颠倒混匀。

5.将pDNA和PEI的混合物在室温下静置10分钟。

6.将pDNA和PEI混合物缓慢加入细胞中，同时摇动细胞培养板混匀。

7.37℃，5% CO₂条件下培养细胞。

三、推荐用量

下表中列出了每10⁶个细胞的推荐试剂量。如果进行其他相似的转染(例如病毒转染)，建议在优化范围内对这些参数进行协同优化。

即使进行共转染，也要保持总DNA浓度范围相同(1.0 ~2.0 μg/10⁶cells)。

如果观察到严重的细胞毒性，请首先考虑减少PEI或DNA的用量。

如果您想了解更多关于PEI转染试剂的问题，欢迎咨询中科百抗。