PEI（聚乙烯亚胺）是一种常用的转染试剂，被广泛应用于生物医学研究领域。作为一种有效的基因传递工具，PEI转染试剂可以将外源基因导入到各种细胞中，并实现高效的基因转染和表达。本文以HEK293悬浮细胞为例，介绍PEI转染试剂的使用说明书。
一、材料准备
1.PEI，1 mg/mL，pH中性，无菌过滤；
2.37℃预热的HEK293表达培养基（血清会抑制转染。请使用减血清，无血清或化学成分限定培养基）；
3.细胞密度为1.5 ~ 2.0×106 cells/mL的HEK293细胞；
4.含目标基因的转染级质粒DNA(pDNA)，浓度为1 μg/mL；
5.可选阳性对照：GFP编码的pDNA。
二、转染前准备
传代扩增细胞，当细胞汇合度大于95%，细胞密度在1.5 ~ 2.0×106 cells/mL时进行转染。
三、转染
1.确保转染前细胞汇合度大于95%，细胞密度为1.5 ~ 2.0×106 cells/mL。
2.用培养基稀释HEK293细胞至1.05×106 cells/mL。
3.分别将pDNA试剂管和PEI（1 mg /mL）试剂管多次颠倒混匀。
4.1 mL待转染培养基需要1 μg pDNA，计算所需pDNA用量，并吸取足量pDNA至干净离心管。用新鲜培养基（5%终培养体积）稀释至20 μg/mL。
5.1 mL待转染培养基需要3 μL PEI（1 mg/mL），计算所需PEI（1 mg/mL）用量，并吸取足量PEI（1 mg/mL）至干净离心管。用新鲜培养基（5%终培养体积）稀释至60 μg/mL。
6.混合稀释的pDNA和PEI。拧紧管盖后翻转几次，于室温反应10分钟。注意在使用前需将拧紧管盖的离心管轻轻翻转一次。
7.每90 mL待转染培养基需要加入10 mL pDNA/PEI混合物。需缓慢加入pDNA/PEI混合物并混匀。
8.按正常培养条件培养细胞。
四、转染后
转染6h后可向培养基种添加补料或添加剂。也可在转染6 h后进行传代培养。
如果使用GFP作为阳性对照，48 h后应观察到转染效率超过70%。对于优化后的工艺，转染效率可达到80%以上。
五、注意事项
1.PEI转染试剂仅供科研使用。
2.在转染前，建议先进行对照实验，确定最佳转染条件。
3.请按照试剂使用说明和安全操作规范进行操作，确保实验的准确性和安全性。
