一、简介

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA或ELASA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。

基本原理：

①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

③用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

二、ELISA主要材料试剂

1.抗原和抗体

在ELISA实验过程中，抗原和抗体的质量是决定实验是否成功的关键因素。本法要求所用抗原纯度高，抗体效价高、亲和力强。ELISA所用抗原有三个来源：天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。

天然抗原取材于动物组织或体液、微生物培养物等，一般含有多种抗原成分，需经纯化，提取出特定的抗原成分后才可应用，因此也称提纯抗原（purified-anigen）。

重组抗原（recombin-antantigen）和多肽抗原（peptide-antigen）均为人工合成品，使用安全，而且纯度高，干扰物质少。因此虽然制备合成抗原有较高的技术难度且要求较为昂贵的仪器设备和试剂，但对那些不易得到的天然抗原，显出其独特的优势。

用于ELISA的抗体有多克隆抗体和单克隆抗体。富含多克隆抗体的抗血清成分复杂，应从中提取IgG才可用于包被固相或酶标记。含单克隆抗体的小鼠腹水中的特异性抗体含量较高，有时可适当稀释后直接进行包被。制备酶结合物用的抗体的质量往往要求有较高的纯度。提纯时可采用硫酸铵盐析IgG后，用分子筛层析提纯，也可用直接使用亲和层析法提纯IgG，此外如果使用酶消化IgG后再提取Fab片段，则效果会更好。

2.ELISA板

可用作ELISA板的物质很多，最常用的是聚苯乙烯和聚氯乙烯，它们具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。作为塑料，可制成各种形式。在ELISA测定过程中，它们作为载体和容器，不参与化学反应。加之它们的价格低廉，所以被普遍采用。专用于ELISA测定的产品也称为ELISA板，国际通用的标准板形是8×12的96孔式。

良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间和同一板各孔之间性能相近。