Nov.2023 21
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快来了解一下TAE缓冲液吧!
细节
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH值,电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应(4H--4e->2H2O+O2),负极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的力,是溶液两极的pH保持基本不变。电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/LNa+离子,Na+离子的浓度太低时速度变慢,太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
TAE缓冲液是非常常见的电泳缓冲液之一,用于DNA琼脂糖凝胶电泳分析。TAE缓冲液包含有Tris,乙酸和EDTATris-acetate提供导电性并可以保持pH值,TAE缓冲液中的EDTA通过螯合二价阳离子(Ca2+,Mg2+)来抑制金属依赖性核酸酶,从而在运行中保护DNA免受核酸酶的影响。TAE缓冲液的缓冲能力低于TBE,因此应避免将其用于长时间和重复的电泳。但TAE缓冲液适用于需要使用DNA修饰酶修饰凝胶洗脱的DNA片段的应用,在这种情况下,应避免使用TBE缓冲液,因为TBE缓冲液的硼酸盐会抑制许多酶(例如DNA连接酶)。
TAE缓冲液是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量 ),且双链线状DNA在其中的迁移率较快,大于13kb的片段使用TAE缓冲液将取得更好的分离效果。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
传统配制的方法,均依托于实验操作人员的水平,无标准质控体系,故无法保证每批次缓冲液一致,极易导致实验重复性差甚至实验失败等结果,人力成本逐渐上升,故中科百抗采用药物制剂技术,将该缓冲液粉剂以TAE速溶颗粒形式呈现,免除配置TAE缓冲液的枯燥过程同时保证试剂的一致性,实验均一性。经过制粒的工艺,将粉末充分混匀后制成一个个细小的颗粒,每个颗粒的成分一致;另外,粉剂溶解时,粉剂结块,表面形成高浓度液层包裹住粉剂,阻碍其溶解,制成速溶颗粒之后,每个颗粒中存在大量的孔道,接触面积增大,溶解速度得到极大的提升。