在细胞培养与实验研究中，细胞结团是困扰众多科研人员的常见问题。这些非预期的细胞聚集体不仅影响细胞计数准确性，干扰实验数据的可靠性，更会阻碍下游应用（如流式检测、单细胞测序）的顺利进行。理解其成因并掌握有效对策，对保障实验成功至关重要。
一、细胞结团的原因
1.物理性聚集：
·离心力与时间：离心速度过高或时间过长，细胞在离心管底部被过度挤压，物理性粘连成团。
·移液操作不当：剧烈吹打、移液器吸头反复刮擦管壁，产生剪切力促使细胞聚集。
·静置时间过长：细胞悬液制备后长时间静置未处理，细胞自然沉降聚集。
2.生物性黏附：
·黏附分子表达：某些细胞类型（如部分免疫细胞、干细胞、转染后细胞）高表达表面黏附分子（如整合素β1），极易自发聚集。
·细胞凋亡/死亡：死亡细胞释放DNA、组蛋白等物质，形成粘性网络“捕获”活细胞形成团块。
·培养基成分影响：含高浓度钙镁离子的培养基或血清中某些成分可能促进细胞间黏附。
二、细胞结团高效解决策略
1.优化物理操作流程：
·温和离心：根据细胞类型调整离心参数（通常建议200-300g，5-10分钟），避免过度挤压。离心后立即轻柔重悬。
·轻柔移液：使用大口径吸头，避免剧烈吹打。重悬时沿管壁缓慢加入缓冲液或培养基。
·及时处理：细胞悬液制备后尽快进行后续实验或分析，减少静置时间。
2.利用化学/酶学解离：
·EDTA/EGTA：添加低浓度（0.5-2mM）螯合剂（如EDTA），竞争性结合钙镁离子，削弱细胞间依赖二价阳离子的黏附。
·DNA酶I：针对死亡细胞释放的DNA粘性物质，添加DNA酶I（如50-100 U/mL）可有效降解DNA网络，解离团块。
·专用解离试剂：对于顽固结团或特定敏感细胞，选用温和的、不含胰蛋白酶的无酶细胞解离试剂。
3.应用抗结团添加剂：
·无血清培养基/添加剂：使用化学成分明确的无血清培养基或添加特定抗结团因子，可显著减少细胞间非特异性黏附，尤其适用于悬浮培养。
·牛血清白蛋白：添加0.1-1% BSA可覆盖细胞表面，减少黏附。
4.物理过滤法：
对于已形成的较大团块，使用细胞滤网（如30-70μm孔径）轻柔过滤，可快速去除团块，获得单细胞悬液。注意选择合适孔径避免损伤细胞。
细胞结团并非不可逾越的障碍。通过精准识别其成因——是物理操作不当、细胞固有特性还是培养基环境影响，并针对性采取优化离心移液、添加螯合剂/酶、使用抗结团添加剂或物理过滤等策略，即可有效获得高质量的单细胞悬液。掌握这些方法，将为您的细胞实验效率和结果可靠性提供坚实保障。
