细胞消化是细胞培养中的关键步骤，目的是将贴壁细胞从培养皿或培养瓶中解离下来，以便进行传代、实验或分析。常用的细胞消化方法包括酶消化法、机械法和化学法。本文主要介绍常见的细胞消化方法和细胞消化的一般步骤。
一、细胞消化方法
1.酶消化法
酶消化法是最常用的细胞消化方法，通过酶的作用破坏细胞与培养表面之间的连接蛋白，使细胞解离。常用的消化酶有胰蛋白酶、胶原酶、胰酶-EDTA混合液等。
（1）胰蛋白酶（Trypsin）：胰蛋白酶可以水解细胞表面的蛋白质（如纤维连接蛋白、层粘连蛋白），破坏细胞与培养表面的连接。适用于大多数贴壁细胞（如HEK293、HeLa、MCF-7等）。
（2）胶原酶（Collagenase）：特异性水解胶原蛋白，适用于富含胶原的组织或细胞（如成纤维细胞、肿瘤组织）。适用于原代细胞、组织块消化。
（3）胰酶-EDTA混合液：EDTA（乙二胺四乙酸）是一种螯合剂，可以结合钙离子和镁离子，削弱细胞间的连接。与胰蛋白酶联合使用，可提高消化效率。适用于大多数贴壁细胞。
（4）Neptry消化液：可对蛋白序列中精氨酸和赖氨酸的羧基端肽键进行切割。适用于贴壁培养细胞消化。
2.机械法
机械法通过物理方法将细胞从培养表面分离，适用于对酶敏感的细胞或原代细胞。
（1）刮除法：使用细胞刮刀或移液器头轻轻刮取细胞。
优点：操作简单，无需酶。
缺点：可能损伤细胞，不适合单细胞悬液的制备。
（2）吹打法：用移液器反复吹打细胞层，使细胞脱落。
优点：适用于部分贴壁不牢的细胞。
缺点：对细胞机械损伤较大。
3.化学法
通过化学试剂破坏细胞与培养表面的连接。
（1）EDTA：EDTA通过螯合钙离子和镁离子，削弱细胞间的连接。单独使用EDTA消化效果较弱，常与胰蛋白酶联合使用。适用于贴壁不牢的细胞（如某些上皮细胞）。
（2）柠檬酸钠：通过螯合钙离子，破坏细胞间连接。适用于某些原代细胞。
二、细胞消化的一般操作步骤
1.准备：
预热消化酶和培养基至37℃。
吸除培养皿中的旧培养基。
2.洗涤：
用PBS洗涤细胞1-2次，去除血清（血清会抑制胰蛋白酶活性）。
3.消化：
加入适量消化酶（如胰蛋白酶-EDTA），覆盖细胞层，置于37℃孵育。
显微镜下观察细胞形态，当细胞变圆并开始脱落时终止消化（通常2-10分钟）。
4.终止消化：
加入含血清的培养基中和消化酶。
5.收集细胞：
用移液器轻轻吹打细胞层，使细胞完全脱落。
将细胞悬液转移至离心管中。
6.离心：
以1000 rpm离心5分钟，弃上清。
7.重悬：
用新鲜培养基重悬细胞，进行传代或实验。
总之，细胞消化方法有很多种，需要根据细胞类型和实验需求，选择合适的消化方法。中科百抗可提供高效、使用简单的细胞消化液—Neptry消化液，有需求欢迎联系中科百抗咨询。
