Jul.2024 05
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细胞消化方法一览
细节

细胞消化是细胞培养过程中的一个关键步骤,用于将细胞从培养容器表面解离出来,以便传代或进行其他实验。常见的细胞消化方法有四种:

1.酶消化法:是最常用的方法之一,可使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶。胰蛋白酶的浓度通常在0.25%-0.5%之间,消化时间根据细胞种类和温度而定,一般在数分钟至数十分钟不等。在操作时需注意Ca2+Mg2+、血清和蛋白会影响胰蛋白酶的活性,因此最好选用不含Ca2+Mg2+但含EDTA的胰蛋白酶。

2.离子螯合法:这种方法不破坏细胞表面分子,仅与细胞粘附分子(CAMs)螯合。常用的离子螯合剂是EDTA,浓度约为0.02%,它对细胞间和细胞与基质间都有作用。这种方法操作简单,不需要额外添加蛋白或血清停止反应。

3.物理法:可以直接通过吹打或使用细胞刮板将细胞从培养皿表面刮下。

4.冷冻法:仅适用于细胞传代时,冷冻后细胞会收缩并脱落。这种方法对细胞伤害较小,无需中止反应或洗涤细胞,适用于贴壁不牢固且较为娇弱的细胞,但可能导致少量细胞脱落。

细胞消化过程中,需要注意以下几点:

1.不必强求完全分离,只要细胞可以移动就表示附着已解除。

2.细胞分离后不一定都是圆形,有些可能呈半球状。

3.对于难以消化的细胞,需要等到大部分细胞脱落再中止消化。

如果细胞消化过度,可立即用培养基中和,吹打细胞并重新传代。在培养过程中,状态不佳的细胞会逐渐死亡脱落,可在更换培养基时清除。

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