电泳缓冲液(Electrophoresis Buffer)是一种用于分子生物学实验中的重要试剂,是电泳实验中不可或缺的重要组成部分,主要用于维持适宜的pH值和离子强度,以便在电场作用下分离生物分子如DNA、RNA和蛋白质。电泳缓冲液的成分和pH值会影响分子的迁移速度和分离效果。
以下是常用速溶颗粒形式的电泳缓冲液详细介绍:
TAE是生物学中广泛使用的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。TAE速溶颗粒是指将日常实验工作中用到的TAE缓冲液(40mM Tris-乙酸盐,1mM EDTA-2Na)以速溶颗粒的形式呈现。TAE速溶颗粒使用简单、快速,无需计算、称量、调节pH等繁琐的配液过程,即取即用。
使用TAE作为电泳缓冲液,电泳时双链线状DNA的迁移率较快。当片段大于13kb时,一般推荐使用TAE进行电泳分离。TAE适合用于DNA片段的回收,由于TAE的缓冲容量小,因此不推荐用于长时间电泳(如过夜)。
TBE是生物学中常用的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。TBE为白色至类白色速溶颗粒。TBE速溶颗粒是指将日常实验工作中用到的TBE缓冲液(89 mM Tris,89 mM硼酸,2 mM EDTA)以速溶颗粒的形式呈现。
TBE的缓冲能力强,对电泳小于1 kb的片段时分离效果更好,也适合较长时间的电泳。TBE用于琼脂糖凝胶时容易造成高电渗作用,并且因为与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而导致DNA片段的回收率降低,因此不推荐用于DNA片段的回收。
核酸电泳缓冲液速溶颗粒配制方法:
1)烧杯中加入约600 mL的蒸馏水,内置磁性搅拌子后置于磁力搅拌器上;
2)用剪刀剪开或撕开TAE或TBE速溶颗粒包装袋,将包装袋内得全部内容物缓慢倒入烧杯,搅拌至完全溶解;
3)向步骤2的TAE或TBE溶液中添加蒸馏水,定容至1 L,所得溶液即为1×TBE工作缓冲液。
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