聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE是用于蛋白质分离的常用技术。蛋白凝胶中丙烯酰胺的百分比会影响蛋白质条带的分辨率,较高百分比的丙烯酰胺可用于分离低分子量蛋白质,较低百分比的丙烯酰胺可用于分离较高分子量蛋白质条带。
凝胶电泳缓冲液主要有三种,分别为Tris-Glycine缓冲液、MES缓冲液和MOPS缓冲液。本文主要介绍三种蛋白电泳缓冲液速溶颗粒的区别和应用。
Tris-Glycine-SDS缓冲液速溶颗粒主要由Tris、甘氨酸和SDS配制而成,适用于Tris-甘氨酸凝胶体系,专为在Tris-甘氨酸凝胶上分离变性状态的蛋白质而配制。
Tris-MOPS-SDS缓冲液速溶颗粒由Tris、MOPS、EDTA和SDS配制而成。MOPS缓冲液是生物学实验中广泛使用的蛋白类凝胶电泳缓冲液,适用于一般的SDS-PAGE蛋白电泳,尤其是针对Bis-Tris体系的PAGE胶,与Bis-Tris蛋白凝胶配合,适用于中等到大分子量蛋白的电泳。MOPS缓冲液不适用于Tris-Glycine和Hepes等缓冲体系的聚丙烯酰胺凝胶。
Tris-MES-SDS缓冲液速溶颗粒由Tris、MES、EDTA和SDS配制而成。MES缓冲液也是生物学实验中广泛使用的蛋白类凝胶电泳缓冲液,适用于一般的SDS-PAGE蛋白电泳,尤其是针对Bis-Tris体系的PAGE胶,与Bis-Tris蛋白凝胶配合,适用于小到中等分子量蛋白的电泳。
MOPS电泳缓冲液和MES电泳缓冲液都可以用于Bis-Tris凝胶电泳中。不同缓冲液的离子迁移效应的差异会影响蛋白折叠,进而导致蛋白分离范围的差异。MES具有更低的pKa,所以蛋白在MES电泳缓冲液中的迁移速度比在MOPS电泳缓冲液中更快一些。
凝胶电泳缓冲液速溶颗粒的配制:
1)烧杯中加入约600 mL的蒸馏水,内置磁性搅拌子后置于磁力搅拌器上;
2)用剪刀剪开或撕开一袋缓冲液速溶颗粒包装袋,将包装袋内得全部内容物缓慢倒入烧杯,搅拌至完全溶解;
3)向步骤2的缓冲液中添加蒸馏水,定容至1 L,所得溶液即为1×工作缓冲液。
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